当社では、コンベンショナル・ノックアウトマウス (完全ノックアウトマウス 、単純ノックアウトマウスともいいます)の作製サービスを提供いたします。

特長

  1. 01

    ご希望内容に応じて種々のストラテジーを提案

  2. 02

    全身の細胞で標的遺伝子が破壊される

  3. 03

    CRISPR/Cas9での受精卵インジェクション法、C57BL/6N由来ES細胞での相同組換え法で対応可能

標準作業
内容・価格

工程
相同組換えベクターの構築
標準作業内容
  1. 標的遺伝子に関する情報をデータベースにより取得し、デザイン案を作成
  2. 相同組換え領域のクローニング
  3. クローニング産物と薬剤耐性遺伝子の組み合わせにより、相同組換えベクターを構築
  4. スクリーニング条件設定のためのコントロール・ベクターを作製
期間

2~3ヶ月

価格(税別)
88万円
工程
相同組換えESクローンの
樹立
標準作業内容
  1. ES細胞株へのエレクトロポレーション
  2. 薬剤耐性ESクローンのピックアップ
  3. PCRによるスクリーニング
  4. PCR解析、Neoプローブによるサザンブロット解析により、相同組換えESクローンを樹立
期間

3~4ヶ月

価格(税別)
140万円
工程
キメラマウス作製
標準作業内容
  1. 最大3クローンの相同組換えESクローンを用いて、キメラマウス作製(全てのキメラマウスがES細胞寄与率80%を下回る場合、再作製)
期間

3ヶ月

価格(税別)
70万円
工程
ヘテロマウス作製
標準作業内容
  1. 自然交配による生殖系列キメラマウスの同定(ES細胞寄与率上位4匹のキメラマウスを、野生型マウスと交配)
  2. 第1世代(F1)ヘテロマウスの取得
期間

3ヶ月

価格(税別)
70万円

合計

※納品にかかる微生物検査費、輸送費は別途必要です。

期間
11~13ヶ月
価格(税別)
368万円
工程 標準作業内容 期間 価格(税別)
相同組換えベクターの構築
  1. 標的遺伝子に関する情報をデータベースにより取得し、デザイン案を作成
  2. 相同組換え領域のクローニング
  3. クローニング産物と薬剤耐性遺伝子の組み合わせにより、相同組換えベクターを構築
  4. スクリーニング条件設定のためのコントロール・ベクターを作製
2~3ヶ月 88万円
相同組換えESクローンの
樹立
  1. ES細胞株へのエレクトロポレーション
  2. 薬剤耐性ESクローンのピックアップ
  3. PCRによるスクリーニング
  4. PCR解析、Neoプローブによるサザンブロット解析により、相同組換えESクローンを樹立
3~4ヶ月 140万円
キメラマウス作製
  1. 最大3クローンの相同組換えESクローンを用いて、キメラマウス作製(全てのキメラマウスがES細胞寄与率80%を下回る場合、再作製)
3ヶ月 70万円
ヘテロマウス作製
  1. 自然交配による生殖系列キメラマウスの同定(ES細胞寄与率上位4匹のキメラマウスを、野生型マウスと交配)
  2. 第1世代(F1)ヘテロマウスの取得
3ヶ月 70万円

合計

※納品にかかる微生物検査費、輸送費は別途必要です。

11~13ヶ月 368万円
工程
薬剤耐性遺伝子の除去
標準作業内容
F1ヘテロマウスとCAG-Flpマウス(あるいは、CAG-Creマウス)との交配により、薬剤耐性遺伝子を除去。さらに、野生型マウスと交配させ、Flpトランスジーン(あるいは、Creトランスジーン)を除去
期間

6ヶ月

価格(税別)
90万円
工程 標準作業内容 期間 価格(税別)
薬剤耐性遺伝子の除去 F1ヘテロマウスとCAG-Flpマウス(あるいは、CAG-Creマウス)との交配により、薬剤耐性遺伝子を除去。さらに、野生型マウスと交配させ、Flpトランスジーン(あるいは、Creトランスジーン)を除去 6ヶ月 90万円
  • ※ 上記価格・納期は当社標準の作業内容の場合となります。ご希望内容によっては価格・納期共に変動することがございます。

オプション:スキップサービス(キメラマウスとCAG-Flpマウスの交配により生殖系列移行と薬剤耐性遺伝子除去を同時実施)

工程
薬剤耐性遺伝子除去
スキップサービス
標準作業内容
  • ES細胞寄与率上位のキメラマウスとCAG-Flpマウスの自然交配の実施※1
  • PCR解析による薬剤耐性遺伝子が除去された第1世代(F1)マウスの同定
  • 薬剤耐性遺伝子が除去されたF1マウスと野生型マウスの自然交配の実施※1
  • PCR解析によるCAG-Flpトランスジーンが除去された第2世代(F2)マウスの同定
  • 8週齢までのF2ヘテロマウスの飼育
期間

6ヶ月

価格(税別)
170万円
工程 標準作業内容 期間 価格(税別)
薬剤耐性遺伝子除去
スキップサービス
  • ES細胞寄与率上位のキメラマウスとCAG-Flpマウスの自然交配の実施※1
  • PCR解析による薬剤耐性遺伝子が除去された第1世代(F1)マウスの同定
  • 薬剤耐性遺伝子が除去されたF1マウスと野生型マウスの自然交配の実施※1
  • PCR解析によるCAG-Flpトランスジーンが除去された第2世代(F2)マウスの同定
  • 8週齢までのF2ヘテロマウスの飼育
6ヶ月 170万円
  • ※1 1ヶ月間の交配で妊娠が確認されない場合、交配ペアを変更しさらに1ヶ月交配を実施します。
  • ※ 納品にかかる微生物検査費、輸送費は別途必要です。
  • ※ CAG-Creマウスでのスキップサービスも可能です

コンベンショナルKOマウスの作製はCRISPR/Cas9での実施も可能です

工程
ガイドRNAの活性確認
ssOligoの合成
標準作業内容
  • 標的遺伝子配列に対するガイドRNAの選択(最大2種類)
  • 選択ガイドRNA配列を組み込んだcrRNAの合成
  • Cas9タンパク質とtracrRNAの準備
  • 標的配列切断活性のin vitro評価
  • ssOligoDNAの合成
期間

2ヶ月

価格(税別)
555千円
工程
受精卵インジェクション
標準作業内容
  • 前核期受精卵(C57BL/6N系統)へのインジェクションと移植
  • 産子の組織採取
  • 8週齢までの産子飼育
期間

3ヶ月

価格(税別)
70万円
工程
ダイレクト
シークエンスによる
遺伝子変異の検出
標準作業内容
  • 解析条件の決定
  • ダイレクトシークエンス解析(判読可能な場合は変異導入配列を確認)
期間

1ヶ月

価格(税別)
40万円
工程
自然交配による
次世代作製
(F1ヘテロマウスの取得)
標準作業内容
  • 指定のファウンダーマウスを用いた自然交配の実施
  • 産子の組織採取
  • 8週齢までの産子飼育
  • ダイレクトシークエンスによる第1世代(F1)マウスの同定
期間

3ヶ月

価格(税別)
ご相談ください
工程 標準作業内容 期間 価格(税別)
ガイドRNAの活性確認
ssOligoの合成
  • 標的遺伝子配列に対するガイドRNAの選択(最大2種類)
  • 選択ガイドRNA配列を組み込んだcrRNAの合成
  • Cas9タンパク質とtracrRNAの準備
  • 標的配列切断活性のin vitro評価
  • ssOligoDNAの合成
2ヶ月 555千円
受精卵インジェクション
  • 前核期受精卵(C57BL/6N系統)へのインジェクションと移植
  • 産子の組織採取
  • 8週齢までの産子飼育
3ヶ月 70万円
ダイレクト
シークエンスによる
遺伝子変異の検出
  • 解析条件の決定
  • ダイレクトシークエンス解析(判読可能な場合は変異導入配列を確認)
1ヶ月 40万円
自然交配による
次世代作製
(F1ヘテロマウスの取得)
  • 指定のファウンダーマウスを用いた自然交配の実施
  • 産子の組織採取
  • 8週齢までの産子飼育
  • ダイレクトシークエンスによる第1世代(F1)マウスの同定
3ヶ月 ご相談ください
  • ※ 実施内容、マウス系統により費用が変わることがあります。

ES細胞を用いた相同組換え法での実施例

構築した遺伝子改変用ベクターをエレクトロポレーションによりES細胞に導入します。PCRによる1次スクリーニング、詳細解析、Neoプローブによるサザンブロット解析により、相同組換えES細胞を樹立します。

ES細胞を用いた相同組換え法での実施例 イメージ

樹立した相同組換えES細胞からマウス作製

樹立した相同組換えES細胞よりマウスを作製します。計画通り遺伝子改変用ベクターが挿入されたES細胞(最大3クローン)からキメラマウスを作製します。F1マウスを作製し、相同組換えES細胞が生殖系列へ移行しているかを確認、ヘテロマウスを取得いたします。

樹立した相同組換えES細胞からマウス作製 イメージ

納品

お客様のご都合に合わせて、当社からマウスを納品します。通常はF1ヘテロ接合体マウスを納品しますが、ご希望に応じてキメラマウス(F0ファウンダーマウス)・ホモ接合体マウスの納品、凍結胚・精子での納品、マウス増産後の納品も可能です。

KOマウス比較表

破壊遺伝子

ランダムに破壊された遺伝子
(約700遺伝子)

作製方法

可変型遺伝子トラップ法

使用ES細胞

TT2(B6×CBA)

納期

マウス:約3ヶ月

権利関係

使用権許諾

破壊遺伝子

ご希望の遺伝子

作製方法

ジーンターゲッティング法あるいはCRISPR/Cas9によるゲノム編集

使用ES細胞

RENKA株(C57BL/6N由来)(CRISPR/Cas9の場合は別系統の受精卵を用いることも可能です。)

納期

マウス:約1年※1
(F1ヘテロマウス作業まで)

権利関係

お客様に帰属

DeltaOne™(作製済ノックアウトマウス・表現型データベース)
破壊遺伝子

創薬ターゲットとして有用性が高いと考えられる遺伝子
(約900遺伝子)

作製方法

ジーンターゲッティング法

使用ES細胞

129由来

納期

マウス:約3ヶ月

権利関係

使用権許諾

TG Resource Bank® ノックアウトマウス
作製受託
DeltaOne™(作製済ノックアウトマウス・表現型データベース)
破壊遺伝子 ランダムに破壊された遺伝子
(約700遺伝子)
ご希望の遺伝子 創薬ターゲットとして有用性が高いと考えられる遺伝子
(約900遺伝子)
作製方法 可変型遺伝子トラップ法 ジーンターゲッティング法あるいはCRISPR/Cas9によるゲノム編集 ジーンターゲッティング法
使用ES細胞 TT2(B6×CBA) RENKA株(C57BL/6N由来)(CRISPR/Cas9の場合は別系統の受精卵を用いることも可能です。) 129由来
納期 マウス:約3ヶ月 マウス:約1年※1
(F1ヘテロマウス作業まで)
マウス:約3ヶ月
権利関係 使用権許諾 お客様に帰属 使用権許諾
  • ※1 CRISPR/Cas9による受精卵インジェクションの場合、約9か月となります。
  • ※ 各サービスの詳細はお問い合わせください。